【抗体课堂】单抗和多抗的那些事儿

在实验过程中，经常会有人问到做IHC/ICC应该用单抗还是多抗？做WB呢？做ELISA呢？今天，小编就来八一...



在实验过程中，经常会有人问到做IHC/ICC应该用单抗还是多抗？做WB呢？做ELISA呢？

今天，小编就来八一八单抗和多抗的那些事儿~

单抗&多抗的定义

单克隆抗体，是指通过B细胞杂交瘤技术，获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体。也就是说，单抗是一个B细胞克隆产生的针对一种抗原表位的单一抗体。

多克隆抗体，是指用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。也就是说，多抗是多个B细胞克隆产生的针对多种抗原表位的多种抗体混合物。

单抗VS多抗

一般来讲，单抗的特异性会优于多抗，而多抗的亲和性会优于单抗。

单抗是单一的抗体，具有针对单个抗原表位的特异性，如果需要检测具有相同氨基酸序列的蛋白家族，单抗就非常适合。单抗和抗原结合的效果取决于抗原能否保持其天然构象。但是抗原的构象一旦由于各种原因发生改变，如由于蛋白相互作用，翻译后修饰，温度，pH，固定，盐浓度等，单抗和抗原结合的效果会受到严重影响。

多抗是混合的抗体，可以识别一个抗原上的多个表位，不太受蛋白质构象变化的影响。一般来说，在一定的pH值和盐浓度范围内，多抗也比单抗更加稳定。但是多抗的特异性较差，即使是使用相同的抗原制备多抗，不同批次间也会存在差异，因而在特异性、一致性方面有很大的局限。

单克隆抗体

多克隆抗体

对免疫原的要求

不纯的免疫原也能得到高纯度的抗体

免疫原纯度越高越好

特异性

高

较低

稳定性

相对较差，对理化条件敏感

较好

标准化

易于标准化，批次间差异小

较难，不同批次的抗体质量差异较大

识别

一个抗原表位

多表位

交叉反应

不常见，可避免非特异反应

很常见，难避免非特异反应

凝集反应

大多数没有

有

沉淀反应

大多数没有

有

制备成本

高

低

制备周期

长

短

单抗和多抗应用的选择

与单抗相比，多抗的特异性较差，所以在用多抗做免疫检测时，更容易造成背景，例如在WB中有杂带，在IHC中背景较深等等。虽然还存在交叉反应性的问题，但由于多抗识别多个抗原表位，即使是有少数几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变，实验结果也不会受到影响。在相同条件下，使用多抗可以提高检测的灵敏度，对于丰度偏低的蛋白也更容易检出。

因此，在选择单抗或多抗时，需要根据实验需求来确定，如果目标蛋白丰度较小，多抗的结合位点更多，可以增强信号；另外，如果需要识别出与免疫原蛋白质具有高同源性的蛋白质，或者从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白，例如当未测试物种中的抗原性质未知时，也可以使用多抗。如果实验对于特异性要求较高，需要排除假阳性，或者需要长期使用时，就应该选择单抗了。

关于科赛博（CusAb）

科赛博抗体平台现已拥有4万多种抗体（含单抗和多抗），包括人类常用抗体，模式生物类相关抗体、小分子抗体、二抗、标签抗体及内参抗体等，并以每年4000种的速度在持续增长。目前，科赛博事业部已成功地建立了ChIP平台，因此我们的抗体不仅能提供Biotin、FITC、HRP等标记，大部分抗体都能进行ELISA、WB、IHC、IF、IP、ChIP等应用验证，致力于为所有用户提供高亲和力、高特异性的优质抗体。

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