我大天朝的中药如何?

 

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我大天朝的中药对于老外来说是“迷の存在”,对各位宝宝来说,如果生病了要吃中药,反应必定是



有的人也许会联想到



但中药也在与时俱进,现在的中药里面成分到底如何?是否还具有那神秘的疗效?

TripleTOF®系统结合中药成分MS/MS数据库快速进行参芪扶正注射液成分分析背景

近年来,鱼腥草事件、刺五加事件、茵栀黄事件、双黄连事件等,都是中药注射剂引发的事故,已成为社会关注的一大焦点。而药注射剂最突出的问题集中在其药效物质基础不明和现行的质量标准偏低,成为制约中药注射剂发展的一大瓶颈,亟待改进。参芪扶正注射液是由传统补气中药党参、黄芪经提取后配制而成的大输液,为中药二类新药,主要用于肿瘤的辅助治疗、冠心病、心绞痛等病症。自上市以来取得了良好的社会效益。全面的进行参芪扶正注射液的化学成分、了解其物质基础是非常必要的。

中药成分分析是复杂和困难的一项工作,近些年来,质谱技术的发展,提供了很好的技术手段,但是目前的鉴定还是根据测定的质量数、碎片离子、对照品以及网络检索等进行分析和鉴定,耗时、耗力,结果准确性不高。

SCIEX TripleTOF®快速高分辨质谱仪,一次进样,获得高分辨的TOF MS和TOF MS/MS,结合中药有效成分高分辨MS/MS数据库,软件自动计算理论分子量、同位素分布,并同时和谱库中的MS/MS进行匹配,自动给出综合得分,直观、快速、准确的给出鉴定结果。

试验方法和材料

药品:

参芪扶正注射液和毛蕊异黄酮苷标准品由中山大学药学院提供。

样品的配制:

参芪扶正注射液样品直接旋转蒸发至最终浓度0.5 mg/mL(以原材料重量计算)。13000转/分离心10 min,取上清液进行LC-MS/MS分析。



液相条件:

Shimadzu 30A系统:

色谱柱:Agilent Eclipse Plus C18, 3.0×150 mm, 3.5 μm

流动相:

A:含有0.1%甲酸水溶液

B:甲醇

流速: 0.3 mL/min

柱温: 40 ℃

进样量: 5 μL

梯度洗脱,梯度条件见表1。

表1. 液相梯度条件



质谱条件:

SCIEX TripleTOF®5600

数据采集方法:信息依赖采集(IDA)每个循环选择8个最强的离子进行MS/MS,即TOF MS-IDA-8 MS/MS。

动态背景扣除(DBS)开启。

Accumulation time: TOF MS 150 ms

TOF MS/MS 80 ms

Cycle time: 0.84 s



质量范围:TOF MS 100-1100;

TOF MS/MS 50-1100

正、负离子模式检测。

质谱参数:

GS1: 60 GS2: 60 CUR: 25

TEM: 550℃ IS: 5500/-4500

DP: 100 CE: +/- 40 ± 20

数据处理:

应用MasterView软件,结合中药成分MS/MS数据库分别进行靶向和非靶向成分分析,数据处理流程见图1。



图1. 靶向和非靶向数据处理工作流程。

结果

根据上述数据处理流程,采用靶向分析方法,对参芪扶正注射液进行成分分析,共鉴定出包括有机酸、氨基酸、寡核苷酸、生物碱、核酸、黄酮、异黄酮以及皂苷类成分共89个化合物,鉴定结果见表2。所有化合物的质量误差均在2ppm以内,结果均经过数据库匹配和理论碎裂与实测MS/MS匹配进行鉴定,鉴定结果准确可靠。

靶向数据库匹配化合物鉴定

在MasterView软件中导入MS/MS数据库中1000多个化合物列表进行峰提取和数据库匹配,根据化合物的分子组成、同位素分布以及MS/MS的匹配度,给出综合评判得分,所鉴定到的各化合物数据库匹配度大于80,图2以黄芪异黄烷苷为例,展示了利用数据库鉴定和确证化合物的过程,通过数据库搜索,快速准确地鉴定到46个化合物。



图2. 黄芪异黄烷苷鉴定结果。A 图蓝色为测得的精确质量数和同位素分布,灰色为理论值,两者匹配很好;B 图蓝色为黄芪异黄烷苷采集所得MS/MS,灰色为数据库的MS/MS,镜像显示,一目了然,数据库匹配良好。在提取获得结果列表中,软件自动给出匹配度、质量误差得分以及综合得分,根据得分快速鉴定出结果,结果准确度高。

靶向成分分析

在MasterView 软件中导入文献中报道以及中药数据库列表中黄芪和党参中的成分列表,进行峰提取和数据库匹配,对于数据库中没有的数据,软件可根据采集到的MS/MS,计算碎片分子组成,同时根据靶向成分的结构式软件可自动给出理论碎裂进行对比匹配,确证结果。见图3~4。



图3. Formula Finder 可根据TOF MS/MS 精确质量数计算中药成分二级碎片的元素组成 (党参碱)。

图4. Fragments Pane 自动进行党参碱结构解析。

根据结构,软件自动给出理论碎裂与实测结果匹配度,选择列表中的碎片离子,自动会在结构中显示出相应的碎裂位点,进行结构确证。在负离子模式下鉴定出62 个化合物,提取离子流色谱图见图5。



图5. 负离子模式下鉴定到化合物的提取离子流色谱图。在正离子模式下鉴定出75 个化合物,提取离子流色谱图见图6。



图6. 正离子模式下鉴定到化合物的提取离子流色谱图。

结论:

应用高分辨质谱TripleTOF®系列,一次进样获得高分辨的MS和MS/MS,运用MasterView™ 软件,结合中药高分辨MS/MS 数据库,软件自动产生谱库匹配度得分,同时软件可根据化合物结构自动匹配理论碎裂和采集的MS/MS 匹配,鉴定结构,可简单、快速、准确的鉴定中药成分。





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