ACS chem. biol. 孤儿受体的小分子调控物

作者报道了COUP-TF II孤儿受体的小分子调控物以及其在脂肪细胞分化和肝基因表达中的作用。...



大家好！本周我分享的文献是ACS Chemical Biology的“Inactivation of the nuclear orphan receptor COUP-TFII by small chemicals”本篇文献的作者是Rennes University的Gilles Salbert。

在人体中，COUP-TF I/II受体家族有48个成员，而COUP-TF II受体由于其疏水口袋被位阻大的氨基酸残基占据难以找到受体从而被认为是孤儿受体，但是COUP-TF II被报道可以被视黄酸激活，说明此孤儿受体可能在细胞水平上形成一个受体结合口袋，而在本篇文章中，作者报道了这个孤儿受体的小分子调控物以及其在脂肪细胞分化和肝基因表达中的作用。

首先作者利用Q-SiteFinder和Pocket-Finder鉴定出了该受体表面有两个可能的疏水口袋，并且又利用PPI-Pred预测了其中一个是蛋白蛋白相互作用的位点，另一个则是非蛋白相互作用的位点，之后他们在对输水口袋中的氨基酸残基进行突变并利用酵母单杂系统检验蛋白活性后，发现W249A, F253A and F295A的突变导致COUP-TF II的活性被严重抑制。

通过计算软件，作者分析此受体表面可以结合一个苯环，于是他们利用已经建立好的酵母单杂系统筛选了多个带有苯基的小分子，他们发现4-甲氧基-1-羟基萘（4-MNol）可以抑制蛋白的转录活性，他们通过抑制蛋白合成阶段和结合DNA阶段发现4-MNol并不是抑制蛋白与DNA结合，而是改变了其氧化还原状态，且自身被氧化为Russing’s Blue，而且此物质还可以诱导蛋白聚沉，从而进一步抑制此蛋白的活性。

随后他们以HepG2细胞作为模型，COUP-TF II可以激活Cyp7a1基因的表达，在加入4-MNol之后，他们用RT-qPCR观察到了该基因表达的下调，随后他们利用ChIP 实验也验证了他们的结论，并且他们用免疫荧光实验验证了4-MNol诱导COUP-TF II的聚沉。

由于COUP-TF II可以抑制脂肪分化，因此他们利用3T3L1细胞作为模型研究了4-MNol对于脂肪分化的影响，他们利用常规培养基作为negative control，利用氟美松作为positive control，利用油红染色，他们发现4-MNol可以诱导脂肪分化。



文章DOI：10.1021/acschembio.6b00593

文章链接：http://pubs.acs.org/doi/pdf/10.1021/acschembio.6b00593

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