蛋白纯度如何一步法达到99%？

一步纯化法得到蛋白浓度达到99%？假的吧，怎么可能？海狸博士针对此产品将一一回复您的问题。...



海狸纳米Strep-tag II磁珠可以在生理条件下纯化得到使Strep-tag融合蛋白。与其他tag相比，这些温和的纯化参数能保存蛋白质的生物活性，并仅经一步层析后即可产出超过99%的纯度。

小编就目前Strep-tagII磁珠客户常见问题，进行整理分享给大家。

Strep-tagII磁珠
纯化的技术原理是什么呢？

   答：主要基于Strep –tagII多肽与Strep-Tactin（一种经过特殊工艺改造的链酶亲和素）的相互作用，在生理缓冲液或是含有其他添加剂的环境下，带有标签的蛋白与固定化的Strep Tactin亲和纯化，经过加有2.5mM脱硫生物素的同种缓冲溶液中即可温和地将纯化的重组蛋白洗脱下来。 这些温和的纯化参数能保存蛋白质的生物活性，并可获得纯度超过99%的目标蛋白。Strep-tagII

的

分子量大约是多少？通常在融合蛋白的什么位置？

     答：Strep-tagII多肽有8个氨基酸( Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys）分子量约为1KDa.作为标签可以在蛋白的N端或是C端，也可以作为两个蛋白域的链接，甚至可以用于换种结构中。Strep-tag磁珠的载量如何呢？

答：海狸纳米磁珠蛋白结合量可以达到7mg Strep-tag II蛋白 /mL Gel纯化蛋白的纯度如何？

答：纯度＞95%。但是如果存在重组蛋白非特异性互作就可能降低蛋白纯度。为了减少污染，可以再结合洗涤和洗脱时加入合适的添加剂(如还原剂，盐，温和的去污剂)。如果是二硫键共价结合的杂蛋白，可以在缓冲液中加入还原剂。非共价键结合一般采用提高离子强度的方法，常用NcCl或Triton X-100，Tween20和CHAPS等。Strep-tagII磁珠结合抗生素的蛋白吗？

答：不会。洗脱下来的蛋白质混有脱硫生物素吗？

答：没有，脱硫生物素不会与蛋白结合货干扰蛋白分析，而且容易通过透析或是过滤去除。

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