鸽抗体检测操作规程

抗体检测间接凝集反应包括病毒的红细胞凝集试验（HA）与病毒的红细胞凝集抑制试验（HI）。HA:许多病毒（正粘...



抗体检测间接凝集反应包括病毒的红细胞凝集试验（HA）与病毒的红细胞凝集抑制试验（HI）。

HA:许多病毒（正粘病毒、副粘病毒等）能凝集某些动物（鸡、人等）的红细胞，这种现象称为红细胞凝集现象，简称血凝。

HI: 当这些病毒与相应的抗体发生特异性结合 后，失去了与红细胞凝集的能力，称为红 细胞凝集抑制。

一般采用HA血凝测定，下面着重讲述HA



一．试验材料： 注射器、抗凝剂、离心机、吸管、微量滴管、平皿、血液、抗原、有机玻璃血凝板25孔、生理盐水、废弃瓶。 二．试验步骤： ㈠红细胞悬浮液的制备： ①采血，用有抗凝剂的注射器采血5-10毫升。

②离心，将血液吸入离心管中，经3000转离心5-10分钟，吸取上清夜和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液洗涤，再加3000转离心5-10分钟，反复三次，将最后一次离心后的细胞泥按5%稀释。

㈡抗原的效价 ①用微量移液器吸取2.5毫升生理盐水滴入玻璃血凝板。



②放入抗原 2滴，每孔反复十余次。

③放入红细胞离心过的7%的比例反复十余次。 ④沉淀。 ⑤恒温37度，20-25分钟。 ㈢红细胞凝集效价：能使鸡红细胞完全凝集的病毒液的最高稀释倍数。


① 滴管向玻璃血凝板每孔加生理盐水一滴（0．025）

② 用病毒抗原液0．025毫升加入第一孔内，旋转稀释，反复操作十余次以上，然后移入第二排，第三排。（稀释倍数依次为1：2—1：2048，最后孔为红细胞对照），最后一次丢弃。 ③ 再以微量滴管加0。5%红细胞悬浮液一滴（同上面抗原反过来操作）。 ④ 振荡，再置37  恒温箱20-30分钟。 ㈣最后的洗涤工作（微量反应板的特点） ①反应板先用自来水反复冲净污物后。 ②干燥后，放2-3%浓度的盐酸中浸泡24小时。 ③捞出后用自来水冲洗多次，干燥。 ④放1%氢氧化钠过夜。 ⑤取出，洁净水冲洗37干燥。 五．结果判定：



凡能使4个凝集单位病毒凝集红细胞的作用完全受到抑制的血清最高稀释度（倍数）称为血凝抑制价。 血凝抑制价在1：80以上为阳性，1；40为可疑，1：20为阴性。

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