【抗体课堂】单抗和多抗的那些事儿
在实验过程中,经常会有人问到做IHC/ICC应该用单抗还是多抗?做WB呢?做ELISA呢?今天,小编就来八一...
在实验过程中,经常会有人问到做IHC/ICC应该用单抗还是多抗?做WB呢?做ELISA呢?
今天,小编就来八一八单抗和多抗的那些事儿~
单抗&多抗的定义
单克隆抗体,是指通过B细胞杂交瘤技术,获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆,产生均一性的抗体。也就是说,单抗是一个B细胞克隆产生的针对一种抗原表位的单一抗体。
多克隆抗体,是指用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物,可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。也就是说,多抗是多个B细胞克隆产生的针对多种抗原表位的多种抗体混合物。
单抗VS多抗
一般来讲,单抗的特异性会优于多抗,而多抗的亲和性会优于单抗。
单抗是单一的抗体,具有针对单个抗原表位的特异性,如果需要检测具有相同氨基酸序列的蛋白家族,单抗就非常适合。单抗和抗原结合的效果取决于抗原能否保持其天然构象。但是抗原的构象一旦由于各种原因发生改变,如由于蛋白相互作用,翻译后修饰,温度,pH,固定,盐浓度等,单抗和抗原结合的效果会受到严重影响。
多抗是混合的抗体,可以识别一个抗原上的多个表位,不太受蛋白质构象变化的影响。一般来说,在一定的pH值和盐浓度范围内,多抗也比单抗更加稳定。但是多抗的特异性较差,即使是使用相同的抗原制备多抗,不同批次间也会存在差异,因而在特异性、一致性方面有很大的局限。
单克隆抗体
多克隆抗体
对免疫原的要求
不纯的免疫原也能得到高纯度的抗体
免疫原纯度越高越好
特异性
高
较低
稳定性
相对较差,对理化条件敏感
较好
标准化
易于标准化,批次间差异小
较难,不同批次的抗体质量差异较大
识别
一个抗原表位
多表位
交叉反应
不常见,可避免非特异反应
很常见,难避免非特异反应
凝集反应
大多数没有
有
沉淀反应
大多数没有
有
制备成本
高
低
制备周期
长
短
单抗和多抗应用的选择
与单抗相比,多抗的特异性较差,所以在用多抗做免疫检测时,更容易造成背景,例如在WB中有杂带,在IHC中背景较深等等。虽然还存在交叉反应性的问题,但由于多抗识别多个抗原表位,即使是有少数几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变,实验结果也不会受到影响。在相同条件下,使用多抗可以提高检测的灵敏度,对于丰度偏低的蛋白也更容易检出。
因此,在选择单抗或多抗时,需要根据实验需求来确定,如果目标蛋白丰度较小,多抗的结合位点更多,可以增强信号;另外,如果需要识别出与免疫原蛋白质具有高同源性的蛋白质,或者从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白,例如当未测试物种中的抗原性质未知时,也可以使用多抗。如果实验对于特异性要求较高,需要排除假阳性,或者需要长期使用时,就应该选择单抗了。
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