让我来告诉你引物有多稳定

开始接触PCR，就离不开和引物打交道，担心反复冻融会造成引物降解？引物该如何稀释，该稀释成多大浓度合适？该如何保存？今天德慧聚生物给大家一一解答并附上引物稀释标准protocol，期待着简化各位小伙伴的实验室生活。...



刚开始接触PCR，就离不开和引物打交道，担心反复冻融会造成引物降解？引物该如何稀释，该稀释成多大浓度合适？该如何保存？今天德慧聚生物给大家一一解答并附上引物稀释标准protocol，期待着简化各位小伙伴的实验室生活。

引物稳定性研究

著名的引物合成公司IDT（Integrated DNA Technology）曾经做过长达两年的引物稳定性的研究，得出以下结论：

1， 对于引物的长期保存而言，环境温度则是最重要的影响因素。建议将引物存于负20℃。

2， 引物需要在室温或者4℃长期保存时，建议将引物溶于TE缓冲液中。比起干粉状态或者溶于TE缓冲液中，引物溶于无核酶水中最不稳定。

3， 一般而言，不论是干粉状态还是溶于TE或者无核酶水中，引物在37℃放置可长达6周也不会降解，

4， 引物反复冻融30次，也不会影响实验结果（如下图）。


引物稀释方法

实验步骤：

1. 装有引物的EP管一般保存于4℃，注意将EP管置于自封袋中密封，防止受潮。临用前稀释。

2. 由于引物呈粉末状，打开时易散失，所以开盖前请先离心14,000rpm，5min，将粉末离心至管底后再进行引物稀释。(关键步骤)注意事项：由于引物保存在高浓度的状况下比较稳定，所以引物一般配制成100 uM (umol/L)的储存液; 使用时可将储存液稀释成10uM，即可用于各种PCR反应。引物反复冻融20次以内不会影响下游实验.3. 引物稀释：引物稀释应使用TE缓冲液，可保护引物不受降解。装引物的EP管上标有引物的nmol数，如果要配成100uM的储存液，加入TE缓冲液的体积为nmol数乘以10，体积单位为微升。如需使用储存液配成10uM的使用浓度，可取10ul储存液加入90ul的TE缓冲液即可。需要做好标记。

4．手指弹匀，瞬时离心，于-20℃长期保存。

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