提高核酸浓度的理想方法

今天德慧聚生物为大家准备了解决此类问题的理想方法——异丙醇沉淀法。该方法操作步骤极其简单，30分钟之内即可得到高浓度，高纯度的DNA或RNA。经验证，该方法不但能提高DNA的浓度和纯度，而且DNA损失率只有10%。...



各位小伙伴们，在繁忙的实验室生活中，是否遇到以下情形：DNA或者RNA浓度太低？DNA或者RNA纯度不佳？今天德慧聚生物为大家准备了解决此类问题的理想方法——异丙醇沉淀法。该方法操作步骤极其简单，30分钟之内即可得到高浓度，高纯度的DNA或RNA。以下是德慧聚生物的详细实验步骤，经验证，该方法不但能提高DNA的浓度和纯度，而且DNA损失率只有10%。碰到类似的问题，可别忘了采纳哦！

1．将需要浓缩的DNA样品装入1.5ml离心管，按样品体积的10%加入醋酸钠（0.3 M，pH 5.2，终浓度） 调节盐浓度 。

2．向DNA/RNA溶液中添加0.6–0.7体积的室温的异丙醇，然后充分混合。    小贴士：请在室温下使用异丙醇，以便最大限度减少盐共沉淀现象。

3．立即在4°C下以10,000–15,000 x g的速度离心样本15分钟。     小贴士：应在4°C下离心，以防止样本过热。

4．小心地倒出上清液，滤纸上倒扣一下。
    小贴士：在离心之前在离心管外侧做标记，可更轻松地确定沉淀的位置。异丙醇沉淀法的沉淀具有玻璃光泽外观难以被观察到。

    小贴士：对于较为珍贵的样本，可保留上清液，直至核酸确定被成功的浓缩。

5．添加1ml预冷的70%-80%无水乙醇，洗涤核酸沉淀。此步骤可去除共沉淀盐，并用更具挥发性的乙醇代替异丙醇，让核酸更易溶解。10,000–15,000 x g，4°C离心10分钟。

6．在不破碎沉淀的前提下，倒出上清液，滤纸上倒扣一下，然后瞬时离心，用移液器吸掉残余上清 。

关键步骤：残留液体的去除瞬时离心，用移液器尽可能吸掉残余上清。乙醇的残留会严重影响下游实验。

7．风干或30度烘干沉淀10分钟。

   小贴士：请勿过度风干沉淀（例如使用真空蒸发器），因为这会造成核酸难以溶解。

8．加入适宜的TE缓冲液重新溶解核酸（根据实验需要也可采用无核酶的纯水溶解）。

    小贴士：根据预期的核酸量和所需的最终核酸浓度，选择适当体积的缓冲液。

小贴士：请使用pH为7.5–8.0的TE缓冲液，因为核酸易在酸性缓冲液中降解。

   

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