细胞单核流式

完整解决方案之Mo-DCs的获取

小旎今天要带您生产Mo-DCs了，方案要细读哦，保证您有收获！...

树突状细胞（DCs）作为一种专职性抗原提呈细胞，是适应性免疫的基石。研究表明，基于DC的疫苗在肿瘤治疗中具有巨大的免疫治疗潜力。

在基础研究和免疫治疗中会用到大量DCs细胞，通常，我们是用单核细胞经过特定的分化/成熟步骤在体外生产DCs的，即单核细胞来源的树突状细胞（Mo-DCs）。为了获得成熟、功能性Mo-DCs（单核细胞来源的DCs），很重要的一点就是，要使用可靠的流程和可靠的试剂。

下面，我们来介绍一下美天旎Mo-DCs完整解决方案，包括单核细胞分选、诱导分化/成熟、表型鉴定及功能检测等过程。

单核细胞分离

使用美天旎CD14磁珠从健康供者PBMCs分选出CD14+单核细胞。用CD14-FITC抗体、PI进行流式细胞仪检测。

结果显示，分选出的CD14+单核细胞的纯度为96.8±3.8%，得率为81.3±8.8%%，活性为97.5±1.4%。

Mo-DCs的分化、成熟

Day0：分离出的单核细胞(3×10⁶ cells)用3 mL的完全培养基（RPMI 1640, 2 mM L-glutamine, 1% autologous plasma），添加250 IU/mL IL-4 、800 IU/mL GM-CSF进行培养。

Day 2：从培养体系吸出1.5 mL，离心。用1.5 mL完全培养基加2倍浓度的IL-4和 GM-CSF，再添加到原培养体系中。

Day 6：从培养体系吸出1.5 mL，离心。用1.5 mL培养基（添加2000 IU/mL IL-6, 400 IU/mL IL-1β, 2000 IU/mL TNF-α, 2 µg/mL PGE₂），再添加到原培养体系中，培养24小时。

Day 7：通过流式检测成熟Mo-DCs (mMo-DCs)的活性为95.4±2.4%，得率为23%。

Mo-DCs鉴定

形态观察：

显微镜下观察细胞形态：在day0，细胞呈球形，为正常的单核细胞。随着分化和成熟的进行，细胞的大小和颗粒度增加，在day6，细胞形态表现为未成熟Mo-DCs形态，在day7表现为成熟Mo-DCs的形态。

流式鉴定：

使用下表中所列流式抗体和MACSQuant 流式细胞仪检测细胞表面的marker和受体的表达。

Mo-DCs功能检测

抗原递呈能力：

用FITC-labeled dextran评估单核细胞、imMo-DCs或 mMo-DCs的胞吞能力。用流式细胞仪检测平均荧光强度（MFI）。结果表明，imMo-DCs具有最高的抗原提呈能力。

迁移能力检测：mMo-DCs具有向CCL19迁移的能力，并呈现剂量依赖性。

Mo-DCs诱导naive T细胞增殖的能力:

我们通过混合淋巴细胞反应实验(MLR)，来评估Mo-DCs诱导naive T细胞的能力：先用Naive CD4 + T Cell Isolation Kit II从PBMCs分选出Naive CD4 + T细胞，再分别与Monocytes, imMo-DCs, mMo-DCs共培养7天，然后检测CD4 + T细胞的增殖情况，结果显示：mMo-DCs能够诱导T细胞增殖。