你容颜的衰老是不是活性氧引起的？流式可以快速、准确检测

多色流式结合CD分子标记，可有效测出各种亚群内的ROS（包括自由基和非自由基）变化...



活性氧（Reactive Oxygen Species， ROS）是氧分子的高度不稳定代谢产物，包括氧自由基（例如超氧离子O2－和氢氧自由基OH－）和非自由基分子（例如过氧化氢H2O2）。对抗自由基是很多化妆品打广告时最常用的一个词，概念是对的，但实际上是否能对抗，鬼知道。

ROS主要由线粒体在电子转移时产生，ROS本身并非有害的，正常水平的ROS在调节线粒体代谢非常重要，而且还是细胞增殖、生存的关键性分子，可调节MAPK、PI3K、ATM等信号通路，影响转录因子。但是，持续的ROS水平增高可导致蛋白、脂质、DNA的改变，从而损伤线粒体代谢，导致细胞功能失调或凋亡。现已有大量文献证实，ROA水平的改变可导致癌症、神经退行性病变、糖尿病、衰老以及其它病理情况。因此，定量检测ROS对于理解疾病的分子机制、诊断或新药研发均十分重要。

检测ROS目前有不少技术，例如激光扫描共聚焦，还有不少探针可特异性检测细胞ROS和线粒体ROS。但流式细胞术，无疑是最快、最强大的，而且结合其它分子标记，多色流式细胞术可在单细胞水平高特异性、高灵敏性检测出某个亚群的ROS改变。

De Biasi等人在2016年9月份的Cytometry杂志中发表《Quantification of mitochondrial reactive oxygen species in living cells by using multi-laser polychromatic flow cytometry》，介绍了如何分别利用MitoSOX检测ROS中的超氧离子，用MitoPY1检测ROS中的过氧化氢，相当于全面覆盖了ROS中的自由基和非自由基，并且同时染CD4、CD8分别选出CD4＋T和CD8＋T，再结合Annexin V和TO-PRO-3 iodide，排除掉死细胞的影响，将多色流式在ROS检测中的优势挥发的淋漓尽致。

设门方法如下

首先选择淋巴细胞群，然后用FSC-A/FSC-H排除粘连体，接着用Annexin V＋TOPRO排除凋亡和死细胞，对活细胞进行分析CD4＋和CD8＋中的ROS改变。



文章中每管标本均设置了200uM H2O2处理20分钟和未处理两组，计算ROS水平就是相对MFI水平（＝100×处理组MFI/未处理组MFI）。文章对比了唐氏综合征患者和正常人的外周血CD4＋、CD8＋中两种ROS分子的表达水平差异，唐氏综合征患者的线粒体功能异常，导致氧化还原水平平衡失调，所以很容易患髓系、B淋巴细胞白血病或淋巴瘤。实际结果也显示11～20岁唐氏综合征患者的CD4＋T 线粒体过氧化氢水平明显高于健康人，CD8＋T也相似，但没CD4＋T明显。



而超氧离子方面，唐氏综合征和健康却无显著差异[b]（这个图我觉得很奇怪，明明除了

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