细胞抗体单克隆

高效筛选优质细胞系（应用篇）

单克隆抗体药物受到持续的关注。在杂交瘤细胞开发过程中的一个主要瓶颈在于从大量的异质性细胞中筛选出高产的候选细胞。利用自动化技术可以克服这一挑战，如ClonePix系统可以原位检测分泌的抗体。详细内容请阅读全文。...

单克隆抗体

单克隆抗体药物受到持续的关注。在2008年到2013年期间，单抗克隆药物的销售额增加了90%，从约390亿美元增长至7 50亿美元，而其他重组蛋白药物仅增长了约26%4。在杂交瘤细胞开发过程中的一个主要瓶颈在于从大量的异质性细胞中筛选出高产的候选细胞。利用自动化技术可以克服这一挑战，如ClonePix系统可以原位检测分泌的抗体。

以下是一个筛选分泌特异性抗双链DNA(dsDNA)病毒抗体的细胞系的实例。

目标：

筛选分泌特异性抗dsDNA病毒抗体的细胞系。

背景：

亲本细胞系采用有限稀释法制备。抗体的历史产量低于3mg/L，且纯化后的抗体质量差异较大，制备过程中存在不同程度的聚合物。

方法：

放大培养亲本杂交瘤细胞后用ClonePix系统分析并挑取目标克隆。从源板中一共挑选出480个克隆，随后用CloneSelect ImagerTM观察5天以确定细胞生长，挑出排名前146个细胞克隆开展抗原特异性分析。

结果：

最终获得两株亚细胞克隆，抗体产物与抗原的结合力良好，且产量较亲本克隆有极大提升(17-25 mg/L vs. ~1 mg/L)。整个杂交瘤细胞筛选的耗时缩短了50%以上。

G-蛋白偶联受体

G-蛋白偶联受体(GPCR)是药物发现中常见的靶标。哺乳动物细胞内源表达水平较低，每个细胞一般不超过3000个拷贝。这个表达水平虽然足够维持适当的受体功能，但是对GPCR药物发现提出了挑战。大部分筛选方法需要在细胞膜上有更高的GPCR表达水平。在一些简单的细胞里构建表达体系的尝试遇到了不少的困难，或来自蛋白质折叠(大肠杆菌)，或来自低表达(酵母)，或是不正确的翻译后修饰(杆状病毒)。因此需要GPCR高表达的哺乳动物细胞用于药物发现。

ClonePix系统可以帮助从大量异质性的转染细胞中分离出稀有的高表达细胞。利用白光成像和荧光成像，ClonePix系统可以定量检测内源性的和细胞表面的GPCR。

其他蛋白质

除了抗体、GPCR外，ClonePix系统还可以用于筛选表达其他蛋白质的高价值细胞，如重组蛋白质(带标签或不带标签)和细胞膜蛋白。利用荧光标记的目的蛋白特异性抗体，结合成像分析和自动化挑取，ClonePix系统能够显著提升高表达细胞系的筛选效率。以下是一些实例。

单克隆性

当开发细胞系用于生物制药时，不管是从质量角度还是从符合监管要求的角度，保证细胞系来源于单个祖细胞都是非常关键的，即要求细胞系的单克隆性。传统的克隆方法(如有限稀释法和FACS)利用统计分析确定单克隆性的置信区间。但是，监管文件要求更加有效的技术和方法确定单克隆性。越来越多的研究人员采用成像系统，如CloneSelect Imager，验证单克隆性并检测细胞的生长过程。